Eksperimintprinsipe
Hemoglobine-elektroforese hat as doel om ferskate normale en abnormale hemoglobinen te detektearjen en te befêstigjen.
Fanwegen de ferskate ladingen en isoelektryske punten fan ferskate hemoglobinetypen, yn in bepaalde pH-bufferoplossing, as it isoelektryske punt fan hemoglobine leger is dan de pH fan 'e bufferoplossing, draacht hemoglobine in negative lading en migreart nei de anode tidens elektroforese. Oarsom beweecht hemoglobine mei in positive lading nei de kathode.
Under in bepaalde spanning en nei in spesifike elektrophoresis tiid, hemoglobins mei ferskillende ladingen en molekulêre gewichten fertoane ferskillende migraasje rjochtingen en snelheden. Dit soarget foar de skieding fan ûnderskate sônes, en opfolgjende kolorimetryske as elektroforetyske skennenanalyse kin wurde útfierd op dizze sônes om ferskate hemoglobinen te kwantifisearjen. De meast brûkte metoade is pH 8.6 cellulose acetate membraan elektroforese.
Binnen it cytoplasma, ethylene glycol groepen (CHOH-CHOH) oanwêzich yn glycogen of polysaccharide stoffen (lykas mucopolysaccharides, mucoproteins, glycoproteins, glycolipids, ensfh) wurde oksidearre troch periodyk soeren en omset yn aldehyde groepen (CHO-CHO). Dizze aldehydegroepen kombinearje mei it kleurleaze pearse-reade Schiff-reagens, en foarmje in pears-reade kleurstof dy't ôfset wêr't polysacchariden yn 'e sel oanwêzich binne. Dizze reaksje is bekend as periodic acid-Schiff (PAS) kleuring, eartiids oantsjutten as glycogen kleuring.
Eksperimint metoade
Materialen:Sellulose acetatemembrane, electrophoresis apparaat(DYCP-38C en voeding DYY-6C), Superior Sample Loading Tool (pipette), spektrofotometer, kolorimetryske kuvetten, buffers.
Buffer:
(1) pH 8,6 TEB Buffer: Weagje 10,29 g Tris, 0,6 g EDTA, 3,2 g boric acid, en foegje destillearre wetter oan 1000 ml.
(2) Borate Buffer: Weagje 6,87 g boraks en 5,56 g boric acid, en heakje destillearre wetter oan 1000 ml.
Proseduere:
Preparaasje fan hemoglobine oplossing
Nim 3 ml bloed mei heparine of natriumcitrate as antykoagulant. Centrifugerje by 2000 rpm foar 10 minuten en smyt it plasma. Waskje de reade bloedsellen trije kear mei fysiologyske saline (750 rpm, 5 minuten sintrifugering elke kear). Centrifugerje by 2200 rpm foar 10 minuten en smyt de supernatant. Foegje in lykweardich bedrach fan destillearre wetter ta, foegje dan 0,5 kear it folume fan koalstoftetrachloride ta. Shake krêftich foar 5 minuten, en dan sintrifuge by 2200 rpm foar 10 minuten om de boppeste Hb-oplossing te sammeljen foar letter gebrûk.
Soaking it membraan
Snij de cellulose acetate membraan yn strips mjitten 3 cm × 8 cm. Soak se yn pH 8.6 TEB-buffer oant folslein verzadigd, fuortsmite en droege mei filterpapier.
Spotting
Brûk in pipet om 10 μl fan 'e hemoglobine-oplossing fertikaal op' e cellulose-acetate-membraan (de rûge kant), sawat 1,5 sm fan 'e râne te pleatsen.
Elektroforese
Giet de borate buffer oplossing yn 'e elektroforese keamer. Plak de cellulose acetate membraan mei de spotted kant oan 'e kathode ein fan' e keamer. Run op 200 V foar 30 minuten.
Eluaasje
Snij de HbA- en HbA2-sônes út, set se yn aparte testbuizen en foegje respektivelik 15 ml en 3 ml destillearre wetter ta. Foarsichtich skodzje om de hemoglobine folslein te eluearjen, dan mingje.
Colorimetry
Nul de absorption mei destillearre wetter foar de elueringsoplossing en mjit de absorption by 415 nm.
Berekkening
HbA2(%) = Absorbânsje fan HbA2-buis / (Absorbânsje fan HbA-buis × 5 + Absorpsje fan HbA2-buis) × 100%
Eksperimintele resultaten berekkening
Referinsjeberik foar pH 8.6 TEB-buffer cellulose-acetatelektroforese: HbA > 95%, HbA2 1%-3.1%
Notysjes
De tiid fan elektroforese moat net te lang wêze. It membraan fan celluloseacetat moat net útdroegje by elektroforese. Stopje elektroforese as HbA en HbA2 dúdlik skieden binne. Langere elektroforese kin banddiffusjon en waziging feroarsaakje.
Foarkom it brûken fan tefolle sample. Oermjittige hemoglobine floeistof kin liede ta band losmeitsjen of ûnfoldwaande kleuring, resultearret yn falsk ferhege HbA nivo.
Foarkom fersmoarging fan it cellulose acetate membraan mei aaiwiten.
De stroom moat net te heech wêze; oars, hemoglobine bands meie net skieden.
Meitsje altyd eksimplaren fan normale persoanen en needsaaklike bekende abnormale hemoglobinen as kontrôles.
Beijing Liuyi Biotechnology produsearret de profesjonele elektroforese tank foar hemoglobine elektroforese dat is it modelDYCP-38Ccellulose acetate membraan elektroforese tank, en d'r binne twa modellen fan elektroforese voeding beskikber foar de cellulose acetate membraan elektroforese tankDYY-2CenDYY-6Cstreamtafier.
Underwilens leveret Beijing Liuyi Biotechnology cellulose acetate membraan foar klanten, en de grutte fan cellulose acetate membraan kin wurde oanpast. Wolkom om ús te freegjen foar samples en mear ynformaasje.
Beijing Liuyi merk hat mear as 50-jierrige skiednis yn Sina en it bedriuw kin leverje stabile en hege kwaliteit produkten oer de hiele wrâld. Troch jierren fan ûntwikkeling is it jo kar wurdich!
Wy binne no op syk nei partners, sawol OEM elektroforese tank as distributeurs wurde wolkom hjitten.
As jo in oankeapplan hawwe foar ús produkten, aarzel dan net om kontakt mei ús op te nimmen. Jo kinne ús berjocht stjoere op e-post[e-post beskerme]of[e-post beskerme], of skilje ús asjebleaft op +86 15810650221 of foegje Whatsapp +86 15810650221 ta, of Wechat: 15810650221
Post tiid: Sep-20-2023